单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗原鱼类特男人、寡核苷酸绘制直接费用高额或的操作流量非常复杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯老师团对在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低投入、跨外来物种、全app平台兼容的全新解决方案。

论文期刊详细资料

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国内 现代有完美的技术院隐性基因病与生长微生态学设计所和国内 现代有隐性基因病学得会协办的国家学界论述刊物，锐意创新于报道范文生命图片完美的技术和中医药学隐性基因病学邻域的国内 创新性设计工作成果。JGG 2021年度应响大分子7.1，Scopus学界论述刊物评议指数CiteScore 9.9，稳居JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY邻域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY邻域Q1区，稳居国内 现代有完美的技术院刊物区别微生态学类1区(Top刊物)，隐性基因病学和生物制品化学与大分子微生态学小类双1区。

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啥是HEATag

正确的“二合为一体”制定

HEATag是由凝集素和HUH内切酶包括的交融淀粉酶

「精准定位器」引擎 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化绘制（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「拼接器」模快 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）数据库索引长条码通过共价联接。

“1+1>2”的特效：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行模板图标与溯源系统。

Fig1: HEATag各种方面符号的工作原理关心图

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实用技巧抽样检查

HEATag到底应该有点能打？

能够在不相同要求下，实现了喂奶猎物肿瘤组织细胞系单肿瘤组织细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。深入分析专业团体为 HEATag 使用了多轮 “压差软件测试”，从组织系到组织核，从超冷藏到冷藏，从新鲜范本到放置范本，全地方校验它的平稳性和安全可靠性分析。

第一个轮试验真对喂乳爬行动物组织受损细胞核系：论述人群选泽了基人、鼠、仓鼠五个植物鱼类的哪几种组织受损细胞核（HEK293T、K562、MEF、CHO），在常温下使用 HEATag 标签后结合测序。终结收回的 11447 个组织受损细胞核中，85.66% 都能在 HEATag 长条码确切切换到原植物鱼类，模板间交叉的情况感染特少，UMAP 聚类分析一下法分析一下这是就直接证明材料，HEATag 长条码与植物鱼类特男人基因组组共同点较高不一。 接下来，測試环境进一点持续：调查工作员试试在 4℃下标志优质生殖上皮组织系、在温度下标志甲醇确定生殖上皮组织系，因此间接标志生殖上皮组织系核。可是即使显眼：所有的环境下，样例标识与动物群讯息均具备有非常好的相关的性，分割较准率超 95%。虽然甲醇确定会会造成少少的转录本交叉性污染破坏，生殖上皮组织系核制取会现一定量 RNA 泄露，生殖上皮组织系业务类型的引用可是即使与优质样例持续统一，证明材料 HEATag 不错标志有差异 加工环境下的工作样例。

Fig2: HEATag 可在有所不同前提条件下完成任务单細胞转录组混样定性分析

才可以标记图片哺乳期间动植物和海洋能无脊椎骨动植物的原代组织

如果你说受损癌细胞系测试测试是 “根本题”，那组识样例即是 “扣减题”， 这样样例因此因受损癌细胞种类错综复杂、自然环境适用于性特殊的，已成为标记图片方法的 “突破点”，而 HEATag 刚好在这样 “突破点” 上彰显了强势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸公司，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞这样不仅能被更准辨认，大多数具体体细胞种类的聚类算法但是都清洗可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋微生物微生物的兼容性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条型码与种群转录组有较高完全完整性，不会会出现因高盐的环境造成的 “标记图片出现异常”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可实行喂乳各种动物策划 样例各种方面 scRNA-seq 剖析

Fig4: HEATag可满足新鲜松茸海底无脊椎神经部分动物几斤 scRNA-seq 深入分析

HEATag与体细胞的依照并不会带来转录组的同质性改变了

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在完工标记图片钓鱼任务的时候，不可能对之后的的转录多组分析引起打扰，保障了探讨的数据的完美性。

Fig5: HEATag就不会的影响子样本的 RNA 传达机制

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明天可期

HEATag 能为单神经元探讨引致哪种？

HEATag 的社会价值，远不仅于 “化解标注间题”，它的灵活机动性和普遍性，正为单神经细胞探究开太多几率性

从广泛应用场地去看

HEATag 能包含从 “简单的相对定性分析”（如癌组建与日常组建、中药治理与参考）到 “大总量深入分析”（如组建上皮神经元图谱制作、高通骁龙量筛分）的全空间要求。如今 PIP-seq、Stereo-cell 等复合型可扩张新技术的壮大，HEATag 还能进那步大幅提升单上皮神经元深入分析的通量，转向教育科研销售团队搞好越大总量的楼盘。

从跨范围升值空间看

HEATag 既选用在转录组学，还能与表观dna组学、球蛋白组学、空间区域组学等方法构建，利用订做指数和寡核苷酸编码序列，HEATag 应该快些融进了 的不同的组学具体步骤，不影响到4g信号捉捕深度1。同样，依托于HEATag还应该趋势单上皮细胞糖组学深入分析方法。

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进行合作情况

拜谱生物工程与陈凯博士生导师达到初阶段合作的意愿

什么值得关注度的是，在 HEATag 系统体流露出巨大的软件应用软件成长性的题材下，拜谱怪物已与我国南方浅海物理学与工程项目全国实验设计报告室（珠海）陈凯教学实现目标第一次的合作想法。男女双方行动计划强调 HEATag 系统的产业的发展化离地、科学图片转换等方面刺激性角度警税，助推此种成本更低费、跨植物物种的单上皮癌细胞核标示系统快一点软件应用软件于具体科学情况，为许多实验设计报告室提拱效率、金钱的单上皮癌细胞核论述软件，促动科学事业者在上皮癌细胞核怪物学、浅海怪物学、皮肤疾病系统等研究方向要先拿到许多突破自我